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目的 探讨硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)在高糖刺激的人胚肾上皮细胞(human embryo kidney epithelial cells,HKC)内的表达以及与胶原分泌的关系.方法 体外培养HKC,分别给予高糖(30 mmol/L)刺激0、6、12、24和48 h后,收集细胞.提取RNA,Real-time PCR检测THEM4 mRNA的表达;提取总蛋白,Western blot检测THEM4、phospho-Akt(Ser 473)、转化生长因子β1 (transforming growth factor ββ,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达;免疫细胞荧光检测THEM4蛋白表达和定位;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)分泌情况.结果 ①高糖培养HKC内THEM4表达明显降低,伴随phospho-Akt (Ser 473)、TGF-β1和α-SMA表达上调;THEM4与TGF-β1和αSMA表达呈负相关(分别为:y=-5.100 9x+ 1.178,R2=0.971 1;y=-3.803 3x+1.408,R2=0.893 9).②高糖可刺激HKC分泌Col Ⅰ、ColⅢ.结论 高糖诱导的HKC胶原的分泌可能是通过抑制THEM4表达,上调phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1和α-SMA蛋白表达而实现的.

作者:陈宁;杨永辉;安晓颖;朱桂云;康丽菲;郝军

来源:河北医科大学学报 2017 年 38卷 12期

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作者:
陈宁;杨永辉;安晓颖;朱桂云;康丽菲;郝军
来源:
河北医科大学学报 2017 年 38卷 12期
标签:
肾小管 上皮细胞 胶原分泌 硫酸酶超家族成员4 kidney tubules epithelial cells collagen secretion thioesterase superfamily member 4
目的 探讨硫酯酶超家族成员4(thioesterase superfamily member 4,THEM4)在高糖刺激的人胚肾上皮细胞(human embryo kidney epithelial cells,HKC)内的表达以及与胶原分泌的关系.方法 体外培养HKC,分别给予高糖(30 mmol/L)刺激0、6、12、24和48 h后,收集细胞.提取RNA,Real-time PCR检测THEM4 mRNA的表达;提取总蛋白,Western blot检测THEM4、phospho-Akt(Ser 473)、转化生长因子β1 (transforming growth factor ββ,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达;免疫细胞荧光检测THEM4蛋白表达和定位;ELISA方法检测细胞上清液中Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Col Ⅰ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,ColⅢ)分泌情况.结果 ①高糖培养HKC内THEM4表达明显降低,伴随phospho-Akt (Ser 473)、TGF-β1和α-SMA表达上调;THEM4与TGF-β1和αSMA表达呈负相关(分别为:y=-5.100 9x+ 1.178,R2=0.971 1;y=-3.803 3x+1.408,R2=0.893 9).②高糖可刺激HKC分泌Col Ⅰ、ColⅢ.结论 高糖诱导的HKC胶原的分泌可能是通过抑制THEM4表达,上调phospho-Akt(Ser 473)、TGF-β1和α-SMA蛋白表达而实现的.