目的:采用消减抑制杂交技术,研究正常食管粘膜和食管癌组织之间的基因表达差异状况,分离食管癌相关基因片段,构建食管癌的消减cDNA文库.方法:以食管癌癌组织为测试子(tester),以正常食管粘膜组织为驱赶子(driver),用消减抑制杂交方法分离食管癌差异表达片段.将该差异表达片段克隆至T载体,经蓝白斑筛选后, 再用PCR方法插入片段筛选出阳性重组质粒,构建食管癌消减cDNA文库.结果:用消减抑制杂交技术分离食管癌差异表达片段,经蓝白斑筛选,得到220个白色克隆;再用PCR方法快速筛选出100个两端分别含连接子Adaptorl 及Adaptor2R的阳性重组质粒100个,从而成功地构建了中国人食管癌特异的消减cDNA文库.结论:构建了中国人食管癌特异的消减cDNA文库.消减抑制杂交技术能快速有效地分离差异表达基因,方法简便、灵敏度高.使用PCR法快速筛选阳性克隆,对于消减文库的构建具有重要意义.
作者：殷智榕；张云汉；陈东；高冬玲；姜国忠；郝志芳
来源：河南医科大学学报 2001 年 36卷 5期
