目的:在靶向克隆酶的作用下,利用PCR靶向克隆构建携带人神经生长因子的重组腺病毒穿梭质粒pShuttle-hNGFβ-EGFP.方法:按PCR引物设计原则设计两条引物,分别在上下游引物的5'端加上12个碱基与线性化载体切口两端同源载体序列,引物合成后PCR反应扩增目的基因hNGF-β,提纯后与EcoRV酶切的穿梭质粒pShuttle-IRES-hrEGFP在靶向克隆酶(LP Recco enzyme)的作用下37℃孵育15 min,转化感受态大肠杆菌,碱裂解法制备及纯化质粒DNA.结果:EcoRV酶切鉴定证实pShuttle-hNGFβ-EGFP构建成功.结论:在不需要限制性内切酶的情况下用靶向克隆酶连接可快速、准确得到穿梭质粒pShuttle-hNGFβ-EGFP.
作者：谢华；王清秀；王家宁；肖敏；黄永章
来源：武汉大学学报（医学版） 2009 年 30卷 2期
