目的:构建TAP1基因慢病毒过表达载体及检测其过表达效率,为制备前列腺癌的免疫细胞疫苗提供基础.方法:将pDONR223-TAP1质粒和pLenti6.3-IRES-EGFP构建形成pLenti6.3-TAP1-IRES-EGFP表达质粒,采用慢病毒包装试剂盒包装产生慢病毒;感染293T细胞后RT-PCR检测目的基因TAP1的表达;采用荧光FACS计算病毒活性滴度.RT-PCR检测转染PC-3细胞后TAP1表达.结果:PCR和测序证实pLenti6.3-TAP1-IRES-EGFP慢病毒质粒构建成功;包装纯化后收集的病毒液滴度经流式细胞仪检测滴度为2.87× 107 TU/ml;转染后的PC-3后,TAP1转染组TAP1的表达量显著高于对照组.结论:成功构建人TAP1基因慢病毒过表达载体,可以上调PC-3细胞TAP1的表达.
作者：邱涛；刘修恒；周江桥；张龙；陈忠宝；陈志远；汪志顺
来源：武汉大学学报（医学版） 2016 年 37卷 2期
