目的 探讨促凋亡基因BAD(Bcl-2-associated death protein)重组慢病毒表达载体构建及其对肺癌A549细胞株增殖的影响.方法 应用PCR法从含有目的基因的质粒pAV MCMV-BAD-GFP中扩增BAD基因片段,克隆至慢病毒载体(pLVX-IRES-ZsGreen 1),应用PCR、酶切和测序鉴定正确后,经病毒包装,感染A549细胞,经流式细胞仪筛选稳定表达细胞株,Western blot鉴定重组慢病毒感染的A549细胞BAD的表达.采用CCK-8试剂盒定点检测细胞的光密度(OD)值,分析BAD蛋白过表达对A549细胞增殖能力的影响.结果 酶切鉴定和基因测序证实长度为507 bp的BAD基因成功克隆至慢病毒表达载体pLVX-IRES-ZsGreen1;重组慢病毒通过感染A549细胞株和流式细胞仪筛选出单克隆细胞株BAD-A549,Western blot检测结果显示,细胞培养BAD-A549细胞可稳定过表达BAD蛋白.体外增殖结果显示,细胞培养120～144 h,BAD组的OD值均较对照组低(P＜0.05).结论 成功构建了BAD重组慢病毒载体,获得稳定表达BAD的A549细胞株.BAD过表达能有效抑制A549细胞的增殖速度.
作者：黄娜；何彦琪；朱静；李为民
来源：四川大学学报（医学版） 2015 年 46卷 3期
