目的：制备新型人源化抗CD20单克隆抗体并检测其与CD20抗原的亲和力和抗肿瘤活性。方法通过计算机模建技术，在蛋白质结构数据库中找到与利妥昔单抗（ rituximab）空间结构最相近的人IgG1为骨架，将利妥昔单抗的互补决定区（ complementarity determining region ，CDR）进行移植和改造，通过重叠PCR方法，扩增出目的基因片段。分别将轻链（L）、重链（H）基因片段克隆到载体pcDNA3．3、pOptiVEC质粒上。瞬时转染至293F细胞，收取细胞上清，用rProteinA亲和层析法纯化目的抗体，并用十二烷基硫酸钠（SDS）-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检验抗体的纯度和表达量，采用Fortebio技术检测抗体与抗原的结合能力，最后通过裸鼠移植瘤生长抑制实验检测抗体的抗肿瘤活性。结果构建了3种抗CD20人源化抗体。抗体在还原SDS-PAGE中表现为两条相对分子质量约为25×103和55×103的条带，与预计条带大小相符；Fortebio实验结果表明，3组抗体与抗原具有良好的亲和活性：利妥昔单抗、L4H7抗体、L5H5抗体和L5H7抗体的Kd值分别为6．48×10－9、1．91×10－9、7．35×10－10和1．91×10－9 mol／L。裸鼠移植瘤生长抑制实验表明，L5H7抗体的抗肿瘤活性优于利妥昔单抗。结论成功构建并表达了3种抗CD20人源化抗体，其中L5H7抗体具
作者：贾茹；靳彦文；李平；刘萱；高婷；刘子敬；曹诚
来源：军事医学 2014 年 11期
