目的：构建带FLAG标签的过氧化物还原酶3（peroxiredoxin3，PRDX3， PRX3）的真核表达载体，并对其在人舌癌SCC15细胞中的定位进行检测。方法以乳腺文库为模板，PCR扩增带有FLAG标签的PRDX3基因片段，并将扩增产物插入到PCDH空载体中，构建成PCDH－FLAG－PRDX3，质粒测序正确后瞬时转染入人胚肾293T细胞， Western免疫印迹检测克隆载体的表达情况，细胞免疫荧光实验检测PRDX3的亚细胞定位。结果双酶切和测序结果表明，PCDH－FLAG－PRDX3真核表达载体构建成功，转染293T细胞后成功表达了FLAG－PRDX3融合蛋白；细胞免疫荧光显示FLAG－PRDX3蛋白定位于舌癌SCC15细胞的细胞质中，不存在于细胞核内。结论成功构建了带FLAG标签的PRDX3真核表达载体，并检测其定位于舌癌SCC15细胞质中，为进一步明确PRDX3在舌癌发生发展中的功能及分子机制奠定基础。
作者：张春霞；程龙；麦宏旭；王琳；张菊会；王恩群；叶棋浓
来源：军事医学 2016 年 40卷 10期
