目的为研究慢性粒细胞白血病(CML)的肿瘤基因疫苗,克隆和表达CML的bcr-abl融合基因片段.方法根据bcr-abl(b3a2)融合基因序列自行设计一对寡核苷酸引物,以CML K562细胞株的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增包含bcr-abl融合位点周围450bp的基因片段,并将其克隆进pGEM-T easy载体.经序列测定证实其阅读框架正确后,将bcr-abl融合基因片段正向插入真核细胞表达载体pcDNA3.1.以脂质体介导重组质粒pcDNAbcr-abl转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,用间接免疫荧光法(IFA)检测基因表达情况.结果成功构建了包含融合位点基因片段的bcr-abl融合基因真核细胞表达载体pcDNAbcr-abl,pcDNAbcr-abl转染的CHO细胞的免疫荧光强度高于K562阳性对照细胞.结论 bcr-abl融合基因片段在真核细胞中能高效表达,pcDNAbcr-abl真核细胞表达载体的构建为进一步研究bcr-abl融合基因在CML防治中的作用奠定了基础.
作者：姜扬文；季明春；钱莉；龚卫娟；万兵
来源：江苏医药 2003 年 29卷 12期
