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目的:构建人 CCCTC 结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)与谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transfer-ase,GST)重组蛋白的原核表达载体,并进行诱导表达。方法以 pEASY-T1-SIMPLE-CTCF 为模板,设计引入限制性酶切位点的 CTCF 引物,PCR 方法扩增目的片段,产物经限制性内切酶酶切后与原核表达载体 pGEX-4T-1连接,构建成 pGEX-4T-1-CTCF 原核表达载体,转化至大肠埃希菌 BL21中,经异丙基硫代-β-D 半乳糖苷(IPTG)进行诱导,Western blot 检测 GST-CTCF 融合蛋白的表达情况。结果经菌液 PCR、质粒双酶切分析、基因测序分析证实重组表达质粒 pGEX-4T-1-CTCF 构建成功,GST-CTCF 融合蛋白产物经 Western blot 鉴定为特异性表达。结论成功构建了 pGEX-4T-1-CTCF 原核表达质粒,获得特异性的 GST-CTCF 融合蛋白,为进一步研究转录因子CTCF 的功能奠定了基础。

作者:付晶晶;易丽君;李红

来源:南昌大学学报(医学版) 2015 年 1期

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作者:
付晶晶;易丽君;李红
来源:
南昌大学学报(医学版) 2015 年 1期
标签:
CTCF 原核表达载体 谷胱甘肽转移酶 重组蛋白表达 CCCTC-binding factor prokaryotic expression vector glutathione S-transferase recombinant protein expression
目的:构建人 CCCTC 结合因子(CCCTC-binding factor,CTCF)与谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transfer-ase,GST)重组蛋白的原核表达载体,并进行诱导表达。方法以 pEASY-T1-SIMPLE-CTCF 为模板,设计引入限制性酶切位点的 CTCF 引物,PCR 方法扩增目的片段,产物经限制性内切酶酶切后与原核表达载体 pGEX-4T-1连接,构建成 pGEX-4T-1-CTCF 原核表达载体,转化至大肠埃希菌 BL21中,经异丙基硫代-β-D 半乳糖苷(IPTG)进行诱导,Western blot 检测 GST-CTCF 融合蛋白的表达情况。结果经菌液 PCR、质粒双酶切分析、基因测序分析证实重组表达质粒 pGEX-4T-1-CTCF 构建成功,GST-CTCF 融合蛋白产物经 Western blot 鉴定为特异性表达。结论成功构建了 pGEX-4T-1-CTCF 原核表达质粒,获得特异性的 GST-CTCF 融合蛋白,为进一步研究转录因子CTCF 的功能奠定了基础。