应用分子伴侣共表达系统表达pfu基因及酶活性测定-临床诊疗知识库

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作者：

张海军；杨君；刘晓光；胡向阳

来源：

云南植物研究 2009 年 31卷 6期

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Pfu 分子伴侣基因克隆载体构建原核表达蛋白纯化酶活测定 Pfu Molecular chaperone Clonging Construction of a Expression Vector Prokaryotic expression Protein purification Enzyme activity assay

将通过In-fution方法构建的pET32a-pfu质粒与可以促进可溶性表达的HG-PGR07质粒一起转入大肠杆菌BL21(DE3)共表达,以pET32a-pfu单独在BL21(DE3)中表达作为对照.用热变性和(NH_4)_2SO_4沉淀去除部分杂蛋白,再经Ni-NAT亲和层析柱纯化分离pfu蛋白,SDS-PAGE检测结果表明目的蛋白大小约为90 kD,与预计的分子量大小一致.最后对其酶活性测定结果表明分子伴侣能够促进pfu基因表达,并能够提高酶活性.

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