目的 构建肿瘤坏死因子α诱导蛋白3相互作用蛋白1 (TNIP1)真核表达载体(pEGFP-N3-TNIP1),观察了解外源TNIP1蛋白的细胞内定位及其在HeLa细胞中的表达.方法 应用RT-PCR从人外周血淋巴细胞中扩增TNIP1基因的开放阅读框(ORF),将目的片段亚克隆入pEGFP-N3中,筛选阳性克隆,提取质粒测序进行鉴定.将表达质粒转染HeLa细胞,荧光显微镜观察融合蛋白在细胞内的表达与定位,实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹分别从mRNA水平和蛋白水平来检测TNIP1在HeLa细胞中的表达情况.MTT实验检测细胞增殖情况、流式细胞仪检测细胞周期.结果 重组质粒双酶切鉴定,在1.9 kb左右有明显的条带,DNA测序结果证实重组质粒pEGFP-N3-TNIP1中含有的目的基因片段与GenBank上登录号为BC0 14008.1的TNIP1基因序列完全一致;荧光倒置显微镜观察重组质粒转染HeLa细胞后有绿色荧光蛋白的表达,转染48 h后通过qRT-PCR和Western blot分别检测到TNIP1mRNA和蛋白质的表达,均较对照明显升高,外源性的TNIP1蛋白主要定位于细胞质中.结论 成功构建了pEGFP-N3-TNIP1真核表达载体,外源表达的TNIP1蛋白主要分布于HeLa细胞的细胞质部分,过表达TNIP1蛋白不影响HeLa细胞的细胞周期及细胞生长存活.
作者：喻丽；李梅章；李金荣；李晓岚
来源：昆明医科大学学报 2015 年 36卷 1期
