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目的 研究整合素连接激酶(ILK)在重组结缔组织生长因子(rCTGF)诱导大鼠原代肝星状细胞(HSC)表型转化中的作用.方法 应用胶原酶原位灌注+密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC,细胞贴壁培养24h后以rCTGF处理,24h后转染ILK小干扰RNA(siRNA)或对照siRNA,设rCTGF对照及空白对照.应用RT-PCR及Western Blot检测转染siRNA 24、48及72 h时HSC α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、ILK及Ⅰ型胶原基因表达水平变化.计量资料采用t检验.结果 与空白对照相比,rCTGF处理可显著上调大鼠HSC αSMA、ILK蛋白及Ⅰ型胶原mRNA表达.转染ILK siRNA可特异性抑制以TGF诱导的ILK表达上调,与rCT-GF对照相比,转染ILK siRNA 24、48及72 h时,HSC ILK蛋白表达分别下调72% ±6% (t=21.39,P<0.01)、87%±9%(t=68.25,P<0.01)及47%±3%(t=18.25,P=0.003);αSMA蛋白及Ⅰ型胶原mRNA表达分别下调5%±1%(t=2.52,P>0.05)及6%±3%(t=1.63,P>0.05)、31%±7%(t=34.77,P<0.01)及20±5% (t=6.71,P<0.05)和67% ±8%(t=58.82,P<0.01)及43%±6%(t=15.21,P<0.01);转染对照siRNA时,HSC ILK、αSMA及Ⅰ型胶原mRNA表达在相同时点无显著变化.结论 ILK可能部分介导了以TGF诱导的大鼠HSC表型转化.

作者:李光明;颜士岩;王军;潘勤;范建高

来源:临床肝胆病杂志 2014 年 30卷 2期

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作者:
李光明;颜士岩;王军;潘勤;范建高
来源:
临床肝胆病杂志 2014 年 30卷 2期
标签:
整合素连接激酶 结缔组织生长因子 星型细胞 RNA,小分子干扰 integrin-linked kinase connective tissue growth factor astrocytes RNA,small interfering
目的 研究整合素连接激酶(ILK)在重组结缔组织生长因子(rCTGF)诱导大鼠原代肝星状细胞(HSC)表型转化中的作用.方法 应用胶原酶原位灌注+密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC,细胞贴壁培养24h后以rCTGF处理,24h后转染ILK小干扰RNA(siRNA)或对照siRNA,设rCTGF对照及空白对照.应用RT-PCR及Western Blot检测转染siRNA 24、48及72 h时HSC α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、ILK及Ⅰ型胶原基因表达水平变化.计量资料采用t检验.结果 与空白对照相比,rCTGF处理可显著上调大鼠HSC αSMA、ILK蛋白及Ⅰ型胶原mRNA表达.转染ILK siRNA可特异性抑制以TGF诱导的ILK表达上调,与rCT-GF对照相比,转染ILK siRNA 24、48及72 h时,HSC ILK蛋白表达分别下调72% ±6% (t=21.39,P<0.01)、87%±9%(t=68.25,P<0.01)及47%±3%(t=18.25,P=0.003);αSMA蛋白及Ⅰ型胶原mRNA表达分别下调5%±1%(t=2.52,P>0.05)及6%±3%(t=1.63,P>0.05)、31%±7%(t=34.77,P<0.01)及20±5% (t=6.71,P<0.05)和67% ±8%(t=58.82,P<0.01)及43%±6%(t=15.21,P<0.01);转染对照siRNA时,HSC ILK、αSMA及Ⅰ型胶原mRNA表达在相同时点无显著变化.结论 ILK可能部分介导了以TGF诱导的大鼠HSC表型转化.