目的构建SEA(D227A)基因的原核表达载体,并进行表达、分离纯化与免疫活性鉴定.方法采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因,通过下游引物上的点突变,使SEA基因第680位碱基由A突变为C,致使SEA成熟蛋白的第227位氨基酸残基由天冬氨酸(GAT)突变为丙氨酸(GCT),构建pGEX-SEA(D227A)重组表达质粒,在大肠杆菌DH5α中原核表达,再通过淋巴细胞增殖实验对其免疫活性进行测定.结果构建的SEA(D227A)基因经测序证实与设计的序列一致;成功地构建pGEX-SEA(D227A)重组表达质粒,转化感受态大肠杆菌DH5α,通过IFTG诱导、GSTrap FF柱分离纯化及凝血酶切除GST后,得到Mr为27 000的目的蛋白.淋巴细胞增殖实验显示,100 ng/mL重组SEA(D227A)可明显刺激淋巴细胞增殖.结论成功地构建了SEA(D227A)基因原核表达载体,并在大肠杆菌中得到高效表达,所得重组SEA(D227A)能够刺激淋巴细胞增殖,但作用与野生型SEA相比较温和.该结果为寻找有效、毒副作用低的超抗原提供了线索.
作者：宋宏萍；隋延仿；叶菁；李增山；陈广生；张秀敏
来源：免疫学杂志 2004 年 20卷 5期
