目的构建pRSET-SEA重组表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导表达超抗原葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxin A,SEA),进行分离、纯化及western blot鉴定.方法采用PCR技术,从产SEA的葡萄球菌标准菌株FRI 100基因组DNA中获得SEA全长序列,克隆入pUC19中,进行测序,构建pRSET-SEA表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS.通过异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达,分离、纯化及western blot鉴定.结果 PCR获得超抗原SEA基因片段,DNA测序结果与文献报道一致;构建了pRSET-SEA表达质粒,并成功地诱导表达出32000 u的蛋白;Western blot鉴定所得蛋白能够与SEA单克隆抗体特异性结合.结论本研究成功地克隆了SEA全长,并进行了原核表达和分离、纯化,获得了SEA蛋白.
作者：叶菁；隋延仿；李增山；陈广生；张秀敏；曹云新
来源：免疫学杂志 2002 年 18卷 6期
