目的:进行点突变的SEA(D227A)基因原核表达载体的构建,并进行表达、分离纯化与鉴定.方法:采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因,通过下游引物上的点突变,使得到的SEA基因752位碱基突变由A突变为C,致使SEA成熟蛋白的第227位氨基酸残基由D(GAT)突变为A(GCT),构建pRSET-SEA(D227A)重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行原核表达,再通过Westem blot进行鉴定.结果:构建的SEA(S227A)基因经测序证实与设计的序列一致.成功地构建pRSET-SEA(D227A)重组表达质粒,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,通过IPTG诱导得到分子量约为32kD的蛋白,Western blot显示其能够与抗SEA的单克隆抗体特异性结合,最后采用Ni2+-NTA柱进行分离纯化.结论:成功地构建SEA(D227A)基因原核表达载体,并在大肠杆菌中得到高效表达,为寻找有效低毒副作用的超抗原提供了线索.
作者：叶菁；隋延仿；陈广生；李增山；张秀敏；曹云新
来源：中国免疫学杂志 2004 年 20卷 8期
