目的：研究升降散对 LPS 诱导大鼠肺泡巨噬细胞（NR8383）TLR4表达及其下游 NF-κB 信号通路的影响。方法用不同浓度 LPS（0、2、10μg／mL）诱导 NR8383细胞，采用 Real-time PCR 和 Western Blotting 分别检测 TLR4的 mRNA 和蛋白表达水平。用带有 NF-κB 的质粒转染 NR8383细胞，双荧光素酶报告基因检测 NF-κB 活性，Western Blotting 检测磷酸化 p65表达水平，Real-time PCR 检测细胞因子 TNF-α、A20、IL-6和 IL-1β的 mRNA 表达水平，ELISA 检测细胞上清液中 TNF-α、IL-6和 IL-1β的含量。将升降散作用于 LPS 成功诱导 NF-κB 上调的 NR8383细胞，Real-time PCR、Western Blotting、双荧光报告基因检测和 ELISA 实验检测升降散在 NR8383细胞中对 LPS 诱导 NF-κB 信号通路的影响。结果 LPS 成功诱导 NR8383细胞中 NF-κB 上调，在蛋白表达和 mRNA 表达水平均证实，LPS 能梯度诱导 TLR4高表达，且与 LPS 浓度呈正相关；同时， LPS 能够诱导 TLR4下游 NF-κB 的激活，增加下游靶基因编码细胞因子的合成与分泌，且与 LPS 浓度呈正相关。10μg／mL升降散作用 NR8383细胞后，能抑制 LPS 诱导 TLR4的高表达和下游 NF-κB 的激活。结论 LPS 能梯度诱导 NR8383细胞中 TLR4的高表达及其下游 NF-κB 的激活

作者：祁明明；马健；赵凤鸣

来源：南京中医药大学学报 2016 年 32卷 2期