目的:利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质,以及探讨分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因的表达.方法:在构建融合蛋白之前,运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质.采用PCR方法将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗肝癌ScFv基因5′端,其3′与人的肿瘤坏死因子TNF-α基因连接构成分泌型单链双功能抗体ScFv-TNF-α基因,将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLxSN,用NIH3T3测定病毒滴度,将重组病毒感染人肝癌细胞命名为HCC/ScFv-TNF-α,以PCR,RT-PCR以及Western blotting 对ScFv-TNF-α基因修饰的HCC9204细胞进行鉴定.结果:运用DNAssist核酸序列分析软件分析ScFv-TNF-α DNA序列翻译并获得了氨基酸序列,运用ANTHEPROT V5蛋白质分析软件分析融合蛋白的二级结构及其理化性质.经酶切及PCR分析鉴定,成功地构建了融合基因表达载体pL(ScFv-TNF-α)SN,并获得高滴度产毒细胞株,以及Western blotting分析证明ScFv-TNF-α基因融合蛋白的表达.结论:利用生物信息学网络资源进行分析预测融合蛋白的性质,为进一步探讨单链双功能抗体基因融合蛋白提供依据.
作者：刘璐
来源：肿瘤防治杂志 2005 年 12卷 22期
