目的:构建正反义人乙酰肝素酶(HPA)的肝癌细胞克隆表达体系,研究其对肝癌细胞转移潜能的影响.方法:建立正反义人HPA真核表达载体,脂质体法转染高转移人肝癌细胞系HCC-P,G418选择培养,以RT-PCR和免疫组织化学检测HPAmRNA及蛋白表达.细胞计数,MTT实验测定细胞生长状况.裸鼠尾静脉注射转染肿瘤细胞.30 d后称肺脏质量,计数肺表面转移结节数,比较不同转染细胞的转移潜能.结果:限制性内切酶及测序证实载体构建成功;RT-PCR证实,转染正反义载体的细胞在HPA mRNA水平上相差10.13倍;免疫组织化学证实,HPA高效稳定表达于转染正义载体的细胞胞质及胞膜上;细胞生长曲线和MTT实验表明,转染基因对细胞生长无明显影响,P>0.05.注射转染反义肝癌细胞组荷瘤鼠肺脏质量和肺表面转移结节数较对照组显著减少,正义组则相反,P<0.01.结论:成功克隆正反义人HPA,并稳定转染HCC-P.HPA基因对肝癌细胞转移潜能具有促进作用,而反义基因则抑制肿瘤的生长.
作者：王中华；王育红；姜福亭；陈学东；黄瑾
来源：中华肿瘤防治杂志 2008 年 15卷 21期
