目的:运用基因重组技术构建人MALAT-1基因种属同源序列(Species homologous fragments/shf)重组真核荧光表达载体,并探讨其在MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1中的表达和对其侵袭转移的影响.方法:应用RT-touchdown PCR的方法,从鼻咽癌患者正常切缘组织中扩增出MALAT-1基因的种属同源序列,将所得的cDNA序列定向克隆至真核表达载体pEGFP-C1质粒中,构建出重组真核荧光表达载体;采用脂质体Lipofectamine 2000介导重组质粒pEGFP-C1-MALAT-1/shf瞬时转染MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1;通过实时荧光定量PCR方法检测MALAT-1基因种属同源序列转染组和空载体转染组细胞中MALAT-1/shf的表达水平;细胞基质胶侵袭实验研究转染组细胞侵袭能力的变化.结果:经酶切鉴定及测序分析,证实成功构建人MALAT-1/shf重组真核荧光表达载体.PEGFP-C1-MALAT-1/shf(6918～8441 bp)转染组平均侵袭细胞数(51.20±5.933)显著高于MALAT-1/mock组(13.40±3.847),差异具有统计学意义(P=0.000).这说明转染pEGFP-C1-MALAT-1/shf(6918～8441 bp)重组质粒后,细胞的侵袭能力明显增强.结论:成功构建了人MALAT-1基因种属同源序列真核荧光表达载体 pEGFP-C1-MALAT-1/shf,并成功在MALAT-1高表达的人鼻咽癌细胞株C666-1中表达,MALAT-1/shf(6

作者：徐川；杨敏慧；田杰；王晓燕；李祖国

来源：中华肿瘤防治杂志 2011 年 18卷 4期