目的克隆并构建编码结核分枝杆菌(MTB)ESAT6,Ag85B和MPT64分泌蛋白的重组表达质粒.方法采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中分别扩增出ESAT6,Ag85B和MPT64基因(288bp,978bp and 687bp),并克隆到T载体,然后用双内切酶消化后,与同样酶消化的pGEX-4T-2连接,转化大肠杆菌E.coli DH5α,阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定.结果酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符,测序结果与文献报道一致,证实符合表达框架.结论成功地克隆并构建了ESAT6,Ag85B和MPT64基因的重组表达质粒pGEX-ESAT6,pGEX-Ag85B和pGEX-MPT64.
作者：陈建波；罗一鲁；谭守勇；冯蝶仪；曹智忠；刘志辉
来源：热带医学杂志 2003 年 3卷 1期
