研制人线粒体 DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）表达谱芯片，鉴定芯片的特异性和稳定性，完善芯片的制备和使用程序，优化实验参数，为线粒体功能研究提供物质基础及技术保障。以人 mtDNA 剑桥序列为标准，设计 mtDNA 编码的13种 mRNA、2种 rRNA 和9种 tRNA 基因及蛋白产物定位于线粒体的核 DNA （nDNA）编码的5种凋亡相关基因寡核苷酸探针。芯片点样仪点制芯片，进行荧光显示和洗脱，用其检测人宫颈癌上皮 Hela 细胞和人肾小管上皮 Hc1细胞 cDNA 文库 mtDNA 编码基因及 nDNA 编码凋亡相关基因的差异表达情况。所点制的芯片扫描结果显示，样点分布均匀、清晰，规整度好，无漏点、连点。cDNA 文库杂交鉴定结果显示，整张芯片荧光信号均匀一致，背景清晰，各基因重复样点杂交结果一致，各质控点能正常显示。成功制备了人 mtDNA 基因表达谱芯片，完善了该芯片的制备和使用程序，通过初步应用，证明所研制的人 mtDNA 基因表达谱芯片具有特异性高、稳定性好等优点，可用于不同组织或细胞样本 cDNA 文库 mtDNA基因的差异表达分析。
作者：孙恒文；胡义德；曾子君；潘燚；方良毅；谭佩欣；曾向伟
来源：生物医学工程研究 2015 年 3期
