目的 克隆人硫氧还蛋白-1(human thioredoxin-1,hTrx1)基因,并构建含有该目的 基因的重组载体.方法 以人胃癌细胞系BCG823、MNK45的总RNA为模板,设计含有酶切位点的特异性引物,用逆转录PCR的方法,扩增hTrx1编码蛋白的cDNA片段,连接至EZ-T载体,形成EZ-T-hTrx1.对EZ-T-hTrx1进行双酶切后将目的 片段连接至pcDNA3.1myc-His,形成pcDNA3.1myc-His-hTrx1,并进行双酶切、测序鉴定.结果 双酶切鉴定显示hTrx1 cDNA成功连入pcDNA3.1myc-His质粒;测序结果显示目的 片段连入质粒,且与GenBank(NM003329)完全一致.该实验成功构建出含hTrx1的重组载体pcDNA3.Imyc-His-hTrx1.结论 hTrx1基因的克隆以及重组载体pcDNA3.1myc-His-hTrx1的成功构建,为进一步探讨hTrx1的生物学活性及其对肿瘤发生的作用机制奠定了基础.
作者：石岩岩；丁士刚；蒋素贞；鲁凤民；张静；刘琳娜；王晔
来源：山东大学学报（医学版） 2010 年 48卷 11期
