目的 构建人miR-147a真核表达载体,检测其在肺腺癌细胞A549中的表达及对细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 以A549细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增miR-147a的前体序列(pri-mir-147a),插入表达载体pSi-lencer4.1-CMV neo,构建pSilencer4.1-147a重组载体,转染A549细胞,qRT-PCR和报告基因分析检测miR-147a的表达；MTT分析检测外源性miR-147a过表达对A549细胞增殖能力的影响；Matrigel侵袭实验检测外源性miR-147a过表达对A549细胞侵袭能力的影响；报告基因分析检测miR-147a对常见肿瘤信号途径的影响.结果 限制性酶切和DNA测序证实pSilencer4.1-147a构建正确；pSilencer4.1-147a转染A549细胞后,qRT-PCR和报告基因分析检测到明显的外源性miR-147a表达；MTT分析和Matrigel侵袭实验结果显示,miR-147a过表达可明显抑制A549细胞的增殖和侵袭能力；报告基因分析结果显示,miR-147a过表达可显著下调pGL4.23-AP1、pGL4.23-ELK1、pGL4.23-cMYC的相对荧光素酶活性.结论 成功构建的人miR-147a真核表达载体能够在肺腺癌细胞A549中有效表达,并对A549细胞的增殖和侵袭产生抑制作用,该作用可能与miR-147a对EGFR-RAS-MAPK途径的抑制有关.
作者：于洋；赵健；钟铠泽；刘春艳；李艺；史婧；陈蔚文；姜安丽
来源：山东大学学报（医学版） 2012 年 50卷 12期
