目的 建立快速检测沙门菌、变形杆菌和金黄色葡萄球菌的多重聚合酶链反应(PCR)方法.方法 本研究依据沙门菌侵袭基因正调节蛋白(hilA)基因、变形杆菌溶血素(hpmA)基因和金黄色葡萄球菌特异性pSa-442序列,运用Primer Premier 5.0分别设计3对特异性引物,预计PCR扩增的目的 基因片段分别为为580 bp、401 bp、256 bp.通过对单管多重PCR扩增的特异性、敏感性分析以及建立L16(43)正交试验对单管多重PCR扩增条件如引物浓度、dNTP浓度和Tm值等的优化,建立了快速同时检测3种食源性致病菌的单管多重PCR方法.结果 该方法检测的灵敏度分别为:94.07 pg沙门菌DNA,140.85 ng变形杆菌DNA,1.41 ng金黄色葡萄球菌DNA.模拟检测食品中的混合3种菌,4 h培养后样品的最低检测限度分别为:沙门菌100 菌落形成单位(CFU)/mL、变形杆菌101 CFU/mL、金黄色葡萄球菌100 CFU/mL.结论 该方法特异性和灵敏度高,检验周期短,可用于对食品中多种致病菌的快速诊检和监控.
作者：沙丹；凌霞；肖勇；吴家林；张敬平
来源：检验医学 2009 年 24卷 3期
