目的：阐明devR基因表达对分枝杆菌生长及感染能力的影响。方法确认野生型牛分支杆菌卡介苗（M．bovis BCG，简称BCG）、devR基因敲除的BCG菌株（简称ΔdevR）和devR基因回补的BCG菌株（简称devR． com）的devR序列正确；在不同时间点测定600 nm下的吸光度（ A）值，绘制3种细菌的生长曲线；以感染复数（MOI）＝10感染人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549（简称A549细胞）和小鼠巨噬细胞Raw264．7（简称Raw264．7细胞），分别采用流式细胞仪和酶联免疫吸附试验于0、24、48、72 h测定细胞凋亡率和乳酸脱氢酶（ LDH）释放水平；采用实时定量PCR（ RT－PCR）测定凋亡相关基因bcl－2和bad的表达水平。结果ΔdevR菌株在早期（培养2～10 d）生长较BCG菌株和 devR．com菌株明显加快（P＜0．01）。ΔdevR菌株感染A549细胞和Raw264．7细胞后，细胞的凋亡和坏死效应明显增加，与BCG菌株和devR．com菌株比较差异有统计学意义（P＜0．05）。3种菌株感染A549细胞均导致凋亡相关基因bcl－2表达上调，且ΔdevR菌株感染组bcl－2基因表达明显高于BCG和devR．com菌株感染组；3种菌株感染Raw264．7细胞均导致凋亡相关基因bad表达上调，且ΔdevR菌株感染组bad基因表达明显高于BCG和devR．com菌株感染组。结论 devR基因敲除的BCG菌株毒力明
作者：旦正尖措；马越云；周磊；付晓蕊；苏明权；郝晓柯
来源：检验医学 2015 年 6期
