目的 探究小续命汤通过下调泛素特异性蛋白酶9X(USP9X)干预脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)炎症反应机制.方法 制备含药血清,使用10％小续命汤含药血清预处理Ⅱ型肺泡上皮细胞.①小续命汤对LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症及功能的影响:实验分为空白组、LPS诱导组、LPS+小续命汤组.ELISA检测炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-8(IL-8)水平.qRT-PCR和Westernblot检测紧密连接蛋白Occludin、Z0-1、Claudin的表达.②小续命汤通过USP9X发挥改善ALI细胞模型的炎症及功能:实验分为空白组、LLPS诱导组、LPS+小续命汤组.PCR和Western blot检测USP9X的表达.③USP9X与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)蛋白相互作用:人肺泡上皮细胞内USP9X过表达后,Co-IP联合质谱检测USP9X与NLRP家族互作,通过Western blot验证确定NLRP3与USP9X的关系.④小续命汤缓解LPS导致的人肺泡上皮细胞焦亡:实验分为空白组、LPS诱导组、LPS+小续命汤组.Western blot检测NLRP3、IL-1β、Pro-IL-1β、Caspase-1、Pro-Caspase-1,PCR检测NLRP3、IL-1β、Caspase-1,CCK-8检测细胞焦亡.结果 ①与模型组比较,小续命汤预处理显著减少LPS诱导的Ⅱ型肺泡上皮细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8的蛋白表达水平(P＜0.0

作者：项忆瑾；蔡定芳；王平；於佳伟；蔡敏；李祥婷

来源：上海中医药杂志 2022 年 56卷 3期