目的:建立一种能稳定获得高活力和高纯度原代小鼠肝脏细胞的分离、纯化及培养方法.方法:应用改良的Seglen二步法原位灌注和机械离心分离肝脏细胞,并用改良的高糖DMEM培养基进行培养.台盼蓝拒染法检测接种时肝脏细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝脏细胞形态变化,应用免疫荧光技术对肝脏细胞进行Albumin染色.结果:每只小鼠可获取肝脏细胞的总产量平均为1.35× 106/g体重,肝脏细胞存活率＞90％.倒置显微镜下观察贴壁前肝细胞直径为35.14 μm± 4.35 μm,肝脏细胞在接种后3h基本完成贴壁;肝脏细胞接种后24h,所有肝脏细胞均强阳性表达成熟肝脏细胞标志物Albumin,肝细胞纯度＞95％.结论:改良的分离纯化及培养方法能稳定获得高产量、高活率及高纯度的小鼠肝脏细胞.
作者：张钰；付亮；鲁超；锁涛；宋陆军
来源：现代生物医学进展 2014 年 14卷 6期
