目的:研究miR-217对高糖诱导的内皮刺激内皮细胞凋亡的作用.方法:培养人冠状动脉内皮细胞,用含D-葡萄糖(30mmol/L)的培养液刺激:(1)利用实时定量PCR检测内皮细胞相关微小RNA(miR-217、miR-137、miR-29c、miR-218、miR451、miR-328、miR-517c和miR-216a等)的表达变化;(2)利用慢病毒感染技术干预内皮细胞miR-217水平,利用流式细胞术检测细胞凋亡水平;(3)生物信息学预测、双荧光素酶报告基因验证以及蛋白免疫印迹法(western blot)确定miR-217的靶基因.结果:(1)实时定量PCR检测发现高糖刺激内皮细胞后,miR-217、miR-137、miR-29c、miR-218等的表达上调(P＜0.01),miR-451、miR-328、miR-517c和miR-216a的表达下调(P＜0.01),其中miR-217比对照细胞升高了5.67倍;(2)慢病毒感染内皮细胞后再经高糖刺激,流式细胞术检测发现过表达miR-217的内皮细胞凋亡水平有显著提高;(3)生物信息学分析发现SIRT1基因的3'非翻译区上存在一个miR-217的结合位点,双荧光素酶报告基因和western blot结果均证明SIRT1是miR-217的靶基因.结论:miR-217可能通过抑制SIRT1的表达参与高糖诱导的内皮细胞凋亡的调控.
作者：俞峰；苏陈；张帅；冯金忠；邱一华；周巍；孙俊波；王燕华；吴峰
来源：现代生物医学进展 2015 年 15卷 13期
