丝氨酸蛋白酶是丙型肝炎病毒重要的功能蛋白和药物作用靶点,其通过分子内(cis)和分子间(trans)方式催化水解前体蛋白,释放病毒功能蛋白.目的:为深入研究病毒蛋白酶活性和抑制剂鉴定需要,实验研究参照丙型肝炎病毒1a亚型菌株蛋白酶天然底物的氨基酸序列特点,设计了一段包含两个天然底物酶切位点的小分子多肽2S,并进行了原核表达.方法:利用PCR方法,合成2S小分子多肽基因,目的基因两端引入BamH I和EcoR I两个限制性酶切位点,双酶切后将基因与表达载体pGEX-4T-2重组,转化大肠杆菌DH:5α,经化学诱导进行GST融合蛋白表达,通过亲和层析柱纯化目的蛋白.纯化的GST-2S融合蛋白在体外反应系统进行酶切鉴定,SDS-PAGE和ELISA鉴定酶切结果.结果:PCR合成的小分子底物多肽2S基因,经与表达载体重组后测序,证实基因序列正确.采用0.5mmol/L浓度的IPTG诱导工程茵过夜,获得表达的目的蛋白,经分离纯化得到融合蛋白GST-2S.GST-2S在体外磷酸盐缓冲系统中与丝氨酸蛋白酶反应,15
作者：胡巍；刘文；凌世淦
来源：中国生物工程杂志 2010 年 30卷 3期
