目的:为了延长人生长激素(HGH)在血浆中的半衰期,构建了高效分泌表达人血清白蛋白(HSA)与HGH融合蛋白(HSA-HGH)的工程毕赤酵母菌株.方法:从人胎肝cDNA文库中扩增HSA基因,从HGH工程菌载体中扩增HGH基因,将其克隆至真核表达载体pHIL-D2,载体线性化后采用电击法转化毕赤酵母GS115.通过原位双层膜法筛选高效分泌表达菌株.分别采用SDSPAGE和Western印迹鉴定融合蛋白.对工程酵母培养条件进行研究,发酵液经离子交换层析、亲和层析和分子筛层析纯化.纯化的蛋白经N端序列测定,分子量测定和等电聚焦电泳进行鉴定.冻干的蛋白制剂经食蟹猴试验进行药代动力学和药效动力学测试.结果:确立了工程酵母的最佳培养工艺,融合蛋白表达量达100mg/L.纯化后蛋白纯度达95％以上,得率达42％.融合蛋白与预期结果一致,经食蟹猴试验,显示有良好的生物活性,与等摩尔剂量的重组人生长激素相比,半衰期延长6.8倍,清除率慢44倍.结论:融合蛋白呈现明显的长效动力学特征,为开发重组长效人生长激素HSA-HGH融合蛋白药物(rHSA-HGH)奠定了基础.
作者：戚楠；张艳红；吴军；马清钧
来源：中国生物工程杂志 2012 年 32卷 12期
