人血清白蛋白和粒细胞集落刺激因子融合蛋白的克隆表达-临床诊疗知识库

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作者：

李道远；邹文艺；范清林；宋礼华

来源：

生物学杂志 2009 年 26卷 6期

标签：

HsA-hG-CSF 融合蛋白毕赤酵母表达 HSA-hG-CSF fusion protein Pichia pastoris expression

构建重组人血清白蛋白粒细胞集落刺激因子(HSA-hG-CSF)表达载体,用毕赤酵母表达该重组蛋白.PCR扩增出人血清白蛋白基因(HSA)和粒细胞集落刺激因子基因(hG-CSF),GGGGS作为小肽接头,采用重叠PCR的方法将HSA和hG-CSF拼接起来,与质粒载体pP1C9K连接,转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α.抽提质粒,用sall酶切重组质粒,电转化法导入毕赤酵母SMD1168中,通过表型筛选和诱导表达实验得到蛋白表达工程茵.Westernblotting分析表明融合蛋白具有粒细胞集落刺激因子免疫原性.NFS-60细胞测活实验分析表明体外活性达到约4.0×10~7 IU/mg.

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