目的:探究miR-146a/b在Hep3B的表达及其上游调控机制和下游靶标蛋白.方法:MTT法检测人正常肝细胞株LO2和人肝癌细胞株HepG2、Hep3B的增殖活性.分别提取3个细胞的总RNA和蛋白,应用RT-qPCR和蛋白印记法分别检测细胞株中miR-146a/b的表达和细胞外调节激酶1/2 (ERK)、磷酸化ERK 1/2(p-ERK1/2)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、NF-κB抑制蛋白α亚基(IκBα)、白介素1受体关联激酶1(IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关蛋白6(TRAF6)的蛋白水平.用抑制剂分别抑制Hep3B细胞PI3K、AKT、ERK、NF-κB信号分子的活性并检测miR-146a/b的表达水平及IRAK1、TRAF6的蛋白水平.结果 Hep3B细胞增殖活力和miR-146a/b表达水平显著高于LO2和HepG2(P＜0.01).蛋白印记结果显示,以LO2为对照组,Hep3B细胞的p-ERK1、ERK1、p-AKT、IκB的蛋白水平明显升高,分别为LO2的10.87、24.68、6.67和1.92倍;IRAK1、TRAF6的蛋白水平明显降低,分别为LO2的0.23和0.003倍.与LO2细胞相比,HepG2细胞的IκB和IRAK1蛋白表达明显升高,分别为LO2的4.46和2.69倍.抑制Hep3B细胞的PI3K和AKT活性12 h和24 h,miR-146a和miR-146b的表达水平显著降低(P＜0.05);抑制ERK和NF-κB的活性12 h和24 h,miR-146a/b的表达水平没有显著变化.抑制PI3K、AKT、ERK、NF-κB信号通路活性均可

作者：董建一；王欣欣；王康伟；陈军；李慧玲；王福金；王爱国；王靖宇

来源：中国生物工程杂志 2016 年 36卷 12期