STK1基因是玉米大斑病菌调控分生孢子发育、渗透胁迫调节和致病性的重要MAPK基因.本文首先构建了含有增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)的毕赤酵母GSS115 (Pichia pastoris GS115)表达载体pPIC3.5K-EGFP,再以玉米大班病菌模式菌株01-23的菌丝cDNA为模板,PCR扩增STK1基因,克隆到pPIC3.5K-EGFP,构建了STK1-EGFP融合基因的GS115表达载体pPIC3.5K-STK1-EGFP.利用电击转化法将该融合基因表达载体转化到GS115感受态细胞内,利用MD培养基筛选、PCR鉴定,获得了STK1-EGFP融合基因的毕赤酵母转化子.通过RT-PCR和荧光观察,发现STK1基因和EGFP基因均可以高效稳定地表达.另外,在试验中我们还发现,在STK1基因起始密码子前加入Kozak序列可以使STK1-EGFP融合基因的表达强度增强4.8倍.以上研究结果为STK1基因表达蛋白的亚细胞功能定位和抗体制备奠定了基础.
作者：张运峰
来源：生物工程学报 2017 年 33卷 6期
