采用人工底物邻硝基苯酚β D 半乳糖苷（ oNPG）为筛选标记，从耐有机溶剂微生物菌库中，筛选出具有较高水解活性的β半乳糖苷酶产生菌，再以乳糖为底物考察菌株低聚半乳糖的合成性能，筛选得到1株产β半乳糖苷酶的Erwinia billingiae WX1。根据GenBank中相同属种的基因组序列推测β半乳糖苷酶基因，克隆得到β半乳糖苷酶基因gal，并在大肠杆菌中实现了来源于Erwinia billingiae菌β半乳糖苷酶的克隆表达。该基因的开放阅读框（ORF）为1428 bp，编码475个氨基酸，理论相对分子质量为5?2×104。镍柱法分离纯化得到电泳纯的β半乳糖苷酶GAL，其酶学性质研究表明最适催化温度55℃，最适pH 7?0；Mg2＋、Mn2＋对该酶起较强促进作用， EDTA对该酶抑制作用较强。利用β半乳糖苷酶GAL的转糖基作用，以乳糖为底物合成低聚半乳糖，初步优化的反应条件：底物乳糖质量浓度400 g／L，每克乳糖添加酶量1?0 U，在40℃反应16 h后，低聚半乳糖合成率达到34％（质量分数），显示了较好的开发前景。
作者：王欣；吴斌；何冰芳
来源：生物加工过程 2015 年 6期
