旨在克隆点青霉菌(Penicillium notatum)中的葡萄糖氧化酶基因(GOD),在毕赤酵母(Phchia pastoris)中异源表达,纯化并研究其酶学性质。利用 PCR 技术从点青霉 No.8312菌株的基因组 DNA 中克隆得到 GOD 基因,将该基因克隆到穿梭载体 pMD-AOX 上并在毕赤酵母 X33中表达,对纯化后的葡萄糖氧化酶的酶学性质进行分析。结果显示,X33-GOD 可高表达具有活性的 GOD,在30℃、pH6.5的条件下,其培养液上清 GOD 酶活可达496 U/mL,比活123.0 U/mg ;重组表达的葡萄糖氧化酶最适温度为40-45℃,最适 pH 为6.0,酶的稳定性研究表明,该酶在 pH3.5-7.0区间和温度低于50℃下稳定。1 mmol/L Zn2+对其有激活作用;Ag+对该酶活性有较大抑制作用。构建出 GOD 的高产毕赤酵母工程菌株,与点青霉 GOD 相比,具有更高的发酵酶活和比活。
作者:高庆华;胡美荣;吴芳彤;陶勇;王云鹏;罗同阳;胡常英
来源:生物技术通报 2016 年 32卷 7期