目的:分离克隆并鉴定巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因.方法:PCR扩增LacZ基因,克隆至pPIC9载体,构建pPIC9-LacZ表达载体,经Sal I线性化后转化巴斯德毕赤酵母GSll5,构建GSll5-LacZ模式菌株;用限制酶介导整合(REMl)技术使GSll5-LacZ菌体基因组产生随机突变,筛选甘油去阻遏的GSll5-LacZA茵体;Southem blot鉴定GSll5-LacZA基因组.用质粒拯救技术和TAIL-PCR克隆未知基因序列并测序.结果:得到甘油去阻遏的GSll5-LacZA茵体,经Southern blot分析,突变仅发生在1个基因中;通过质粒拯救和TAIL-PCR,分离得到阻遏相关基因GR1,共2 863bp,经在线BLAST,发现其编码一种过氧化物酶体自吞噬相关蛋白.结论:分离得到阻遏相关基因GRI,与过氧化物酶体自吞噬相关,提示过氧化物酶体自吞噬相关基因可能对醇氧化酶启动子AOXl的转录活性有影响.
作者：姚学勤；薛冲；赵洪亮；何庆；孙博；刘志敏
来源：生物技术通讯 2009 年 20卷 4期
