目的 采用RNA干扰(RNAi)技术沉默水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)基因的表达,观察其对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响. 方法 构建针对AQP1的shRNA重组质粒,脂质体法转染MCF-7细胞,实验分为正常对照组、阴性对照组和4个AQP1-shRNA转染组.通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)和Western blot法检测转染前后MCF-7细胞中AQP1mRNA和蛋白表达水平.CCK-8法检测AQP1对MCF-7细胞增殖活性的影响,流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡,Western blot法检测Caspase-3的变化. 结果 四组特异性shRNA转染MCF-7细胞后48 h,AQP1基因的mRNA和蛋白水平均不同程度降低,其中以AQP1-shRNA4对AQP1的沉默效果最明显(mRNA和蛋白表达抑制率分别为70.54％和72.42％).AQP1基因沉默48 h后,与正常对照组相比,MCF-7细胞的增殖活性明显受抑(P＜0.05);细胞凋亡率显著增加为(27.77±2.82)％(P＜0.05);细胞中的Caspase-3蛋白表达水平显著上调(P＜0.05). 结论 AQP1表达沉默可有效抑制MCF-7细胞的增殖,促进细胞凋亡,提示AQP1有望成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点.
作者：李卓；王瑶；辛娜；田宇；李建华；康炜
来源：山西医科大学学报 2015 年 46卷 11期
