目的:克隆Tp0821,Tp0319,Tp0971和Tp0663基因,构建原核表达质粒,进行重组蛋白的表达、纯化并用于检测梅毒病人血清抗体,从而探讨Tp0821,Tp0971,Tp0319和Tp0663重组蛋白在 Tp感染诊断中的作用,丰富梅毒血清学诊断的候选抗原库。方法从Tp库中筛选Tp0821,Tp0319,Tp0971和Tp0663四种膜蛋白,通过生物信息学软件分析挑选优势抗原表位,与 pQE32载体进行连接分别构建 pQE32/Tp0821,pQE32/Tp0319,pQE32/Tp0971和 pQE32/Tp0663原核表达重组体;进行体外克隆表达与纯化,并分别以单一的 Tp0821,Tp0319,Tp0971,Tp0663及四种重组蛋白嵌合抗原(Tp0821-Tp0319-Tp0971-Tp0663)为包被抗原建立间接Tp-ELISA方法,以TRUST和TPPA法为对照,检测2013年1月~2014年6月深圳市宝安区人民医院门诊及住院Tp阴性患者160例和 Tp阳性83例临床标本,评价其在梅毒血清学诊断中的应用。结果成功构建原核表达载体 pQE32/Tp0821,pQE32/Tp0319,pQE32/Tp0971和 pQE32/Tp0663;高效表达和纯化出各自相对分子质量的重组蛋白。建立的间接 Tp-ELISA法检测160例 Tp阴性和 8 3例 Tp阳性临床标本,与TPPA相比,敏感度分别为85.5%(71/83),84.3%(70/83),89.2%(74/83),81.9%(68/83)及95.2%(79/83)
作者:房笃智;阳建;杨荣志;唐诚
来源:现代检验医学杂志 2015 年 1期