目的 探讨microRNA-709(miR-709)在顺铂引起肾小管上皮细胞损伤模型中的作用及机制.方法 体外培养小鼠肾小管上皮细胞,予不同浓度(0、1、5、10、20 μmol/L)顺铂刺激24 h,以10 μmol/L顺铂刺激不同时间(0、2、6、12、24 h).采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测细胞miR-709的表达变化.实验组分为上调对照组、miR-709过表达组、下调对照组、miR-709下调组,其中miR-709下调组和下调对照组加顺铂刺激.应用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,分光光度法检测含半肮氨酸的天冬氨酸水解酶(Caspase-3)活性,Western blot法和RT-PCR检测上皮细胞标志蛋白E-cadherin及其mRNA的变化.JC-1(线粒体膜电位)荧光探针检测线粒体膜电位,流式细胞术检测线粒体超氧化物(mitoSOX)生成,PCR检测线粒体基因(mtDNA)拷贝数.结果 miR-709在5 μmol/L顺铂刺激小管上皮细胞后开始明显升高(F =22.17,P＜0.05),10μmol/L顺铂刺激12 h开始明显升高(F=33.462,P＜0.05);过表达miR-709后细胞凋亡数目、Caspase-3活性较上调对照组增加,E-cadherin表达较上调对照组下降,差异均有统计学意义(凋亡:1.54±0.20比1.00±0.23;Caspase-3活性:1.27±0.08比0.97 ±0.08;E-cadherin:0.47 ±0.15比1.00±0.10;t=-3.086、-5.882、5.671,P均＜0.05);线粒

作者：倪佳佳；郭燕；杨玲云；王荣；林加娟；丁桂霞；张爱华；黄松明

来源：中华实用儿科临床杂志 2015 年 30卷 9期