本课题研究了氯化镉(CdCl2)诱导HEK293细胞(人胚胎肾细胞系)的凋亡,初步探讨了凋亡过程中Caspase-3、Bcl-2的变化和凋亡诱导因子(AIF)的转移以及它们的意义.MTT法检测CdCl2对HEK293细胞增殖的抑制作用;通过倒置显微镜、电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术、激光共聚焦观察细胞凋亡;应用Western blot法和荧光免疫法测定Caspase-3酶原、Bcl-2蛋白的变化以及检测AIF蛋白在细胞中的定位.结果显示:CdCl2对HEK293细胞具有显著的生长抑制作用,并呈明显的剂量和时间依赖性.在琼脂糖凝胶电泳中,显示有凋亡细胞特有的DNA梯状条带,其中30μmol/L作用6-9 h梯状条带最为清晰,时间过长或浓度过高则梯状条带逐渐模糊,表明镉浓度过高或处理时间过长,细胞有坏死.流式细胞仪检测也印证了这一结果.形态学观察可见明显的细胞凋亡特征.同时线粒体膜电位明显下降,发现Caspase-3酶原蛋白、Bcl-2蛋白含量减少,并具有时间依赖性;另外检测到线粒体AIF向细胞核转移.而Bcl-2转染后有一定的抑制凋亡作用.实验结果提示,CdCl2能够诱导HEK293细胞凋亡,线粒体损伤导致AIF转移与细胞色素c释放,从而引发的非Caspases与Caspases凋亡途径可能在镉引发的细胞凋亡过程中起重要作用,而Caspase-3,Bcl-2起着重要的调控作用.
作者：叶记林；毛伟平；吴爱莲；赵洁明；张超；张娜娜；姜平；田婷
来源：分子细胞生物学报 2007 年 40卷 1期
