目的 利用原核系统获得重组结核分枝杆菌Lsr2蛋白,制备抗Lsr2多克隆抗体. 方法 以临床标准株H37RvDNA为模板,合成引物PCR扩增Lsr2核酸序列,插入原核表达载体pET28a,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导表达,柱上复性纯化后,重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备并纯化抗Lsr2多克隆抗体,采用间接ELISA和Western-blotting实验对抗体进行验证. 结果成功构建pET28a-Lsr2表达质粒,重组蛋白Lsr2经SDS-PAGE电泳鉴定分子量为14 kD.亲和层析及柱上复性后,纯化的重组蛋白纯度在95％左右.制备的抗Lsr2多克隆抗体效价在1:5.5× 106以上,并能特异性识别纯化的重组蛋白和结核分枝杆菌菌体蛋白. 结论成功在原核系统内表达并纯化了重组结核分枝杆菌Lsr2蛋白,制备了高效价的抗Lsr2多克隆抗体,为进一步研究Lsr2蛋白的功能,筛选其下游相互作用蛋白以及相关分子机制研究奠定了基础.
作者：孙卫国；侯江厚；李改平；杨栗坤；孙雯娜；张灵霞
来源：实用预防医学 2019 年 26卷 4期
