目的:利用基因工程技术原核表达并纯化结核分枝杆菌α晶体蛋白(Acr).方法:以结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,通过PCR方法扩增Acr的编码基因,以pCold为载体构建重组质粒,再转化到表达宿主菌大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western印迹分析和纯化该表达产物.结果:构建了具有正确基因序列的Acr重组表达质粒,重组Acr在大肠杆菌BL21(DE3)中经低温诱导得到可溶性表达;分别用6×His的单克隆抗体和16-kDa单克隆抗体对表达产物进行Western印迹分析,结果显示在相对分子质量约19000处均有特异性条带,与预计大小吻合;纯化后蛋白纯度达90%,浓度达0.8 mg/mL.结论:表达了重组可溶性Acr,为深入研究该蛋白的生物学、免疫学活性奠定了基础.
作者:王晓娜;刘大斌;安小平;李存;李建彬;范华昊;张文慧;张博;米志强;童贻刚
来源:生物技术通讯 2012 年 23卷 4期