目的 构建结核分枝杆菌复活促进因子E(RpfE)的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达并纯化.方法 采用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出RpfE基因,双内切酶消化后,与同样酶消化的pET32a(+)载体连接,转化大肠杆菌Top10.阳性克隆经酶切和DNA测序鉴定正确后,将重组质粒转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,由T7启动子调控表达RpfE蛋白,并对表达蛋白进行鉴定和纯化.结果 双酶切鉴定所切下的片段大小与预期相符,测序结果与文献报道一致.经SDS-PAGE分析和Western blot鉴定,在相对分子质量41 000处均可见特异性蛋白条带.经Ni2+-NTA金属螯合层析后,重组蛋白纯度可达90
作者：徐蕾；何永林；李娜；王瑜伟；朱道银
来源：中国生物制品学杂志 2007 年 20卷 4期
