目的：探讨亲磷脂酸磷脂酶 A1（PA-PLA1）基因沉默对小鼠分泌胰岛素细胞 MIN6分泌功能的影响。方法：根据 GenBank 中小鼠 PA-PLA1基因 mRNA 序列构建 siRNA 表达载体（pGPU6-PA-PLA1）并转染MIN6，实时荧光定量 PCR 和 Western blot 筛选有效干扰载体。将获得的有效干扰载体转染 MIN6细胞48 h后进行葡萄糖刺激实验，检测其胰岛素分泌的变化。结果：酶切及测序证实成功构建了4个靶向 PA-PLA1的 siRNA 表达载体。实时荧光定量 PCR 和 Western blot 分析显示 siRNA 表达载体 pGPU6-PA-PLA1-1885具有较高的干扰效率，其转染的 MIN6细胞 PA-PLA1 mRNA 水平降至对照组的46．3％，PA-PLA1蛋白水平降至对照组的33．9％，同时胰岛素分泌水平降至对照组的65．0％（P ＜0．05）。结论：PA-PLA1基因沉默可降低MIN6的胰岛素分泌水平。
作者：莫之婧；苏何玲；朱华；李红岩；杨易；史云龙；黄海霞；刘永明
来源：实用医学杂志 2014 年 18期
