目的 通过奥沙利铂(Oxaliplatin,OXA)浓度梯度法构建耐药细胞株,探讨OXA治疗胃癌时的耐药机制,为逆转耐药策略提供实验依据.方法 采用OXA浓度梯度培养人胃癌细胞MGC-803,复制OXA耐药细胞株模型(MGC-803/OXA),用倒置显微镜观察细胞的形态学变化、检测细胞耐药指数RI;用流式细胞仪检测细胞周期分布及凋亡,RT-qPCR检测耐药相关基因MDR-1、MRP、ERCC1mRNA表达,Western blot检测耐药相关基因蛋白MDR-1、MRP、ERCC1及自噬相关蛋白P62、Beclin-1和LC3表达;同时用透射电镜观察细胞中自噬体数量及结构变化.结果 OXA浓度梯度培养成功构建耐药细胞株MGC-803/OXA,半抑制浓度(IC50)为62.33μmol/L,RI为7.01(RI>5符合耐药株的要求);MGC-803/OXA细胞株细胞增殖减慢,细胞周期出现G2/M期延长,细胞凋亡率降低,MDR-1、MRP、ERCC1耐药相关基因和蛋白表达高于MGC-803,表明成功构建了胃癌耐药细胞模型MGC-803/OXA;与MGC-803相比,MGC-803/OXA中P62表达降低、Beclin-1表达和LC3-II/I比值增高,具有典型的、内含胞浆成分的空泡状双层膜样结构的自噬体,且数量显著增加.结论 OXA浓度梯度法能成功构建耐药细胞株,表现为增殖减慢、G2/M期延长、凋亡减少,并且自噬水平增强.
作者：聂微；严芝强；成兴真；刘丽荣；杨芳
来源：实用医学杂志 2022 年 38卷 7期
