目的:探讨乙型肝炎病毒x基因(HBx)转染人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)后对其凋亡及细胞因子分泌的影响及可能机制. 方法:体外培养HK-2细胞,用分子克隆法构建pcDNA3.1/myc-HBX质粒,采用脂质体转染法瞬时转染HK-2细胞,实时荧光定量PCR (RT-PCR)及蛋白印迹法验证HBx在HK-2细胞中的表达.以未转染质粒组和转染空载质粒pcDNA3.1/myc组作为对照,显微镜观察转染HBx基因后HK-2细胞形态,RT-PCR检测各组细胞Toll样受体4(TLR4) mRNA水平,蛋白印迹法检测各组细胞TLR4的表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,ELISA检测细胞培养上清中白细胞介素4(IL-4)、干扰素γ(IFN-γ)水平. 结果:转染pcDNA3.1/myc-HBx质粒后的HK-2细胞中HBx mRNA和蛋白表达水平明显增加,证实转染成功；转染HBx基因组细胞形态不规则,细胞状态受损；与对照组相比,转染HBx基因组TLR4的表达水平明显上调(P＜0.05),凋亡细胞数量明显增多(P＜0.05),细胞上清液中IFN-γ水平增加,但IL-4水平降低. 结论:经构建pcDNA/myc-HBx质粒并转染肾小管上皮细胞可成功制备乙肝病毒细胞感染模型,由此导致的肾小管上皮细胞凋亡可能与HBx引起肾小管上皮细胞TLR4的表达上调有关,HBx亦能导致细胞因子分泌紊乱.
作者：王轩；周益；朱楠；袁伟杰
来源：肾脏病与透析肾移植杂志 2012 年 21卷 6期
