目的 研究香菇C91-3菌丝体发酵液中的粗蛋白LFP91 -3的分离纯化方法,提取具有抗肿瘤活性的蛋白组分,并初步鉴定其药效及特性.方法 LFP91 -3经盐析、透析、Sephadex G - 100凝胶过滤层析分离.用考马斯亮蓝法测定各管收集液中的蛋白浓度,依此绘制洗脱曲线,按曲线对收集液分组；用MTT比色法分别测定各组蛋白收集液对肿瘤细胞的生长抑制作用.对抑瘤率最大的一组各管收集液分别做SDS - PAGE电泳银染,取电泳条带相对较单一的峰尖部数管收集液合并,即为本实验的提取蛋白,以MTT比色法测定其对肿瘤细胞的生长抑制作用.用考马斯亮蓝法和硫酸-苯酚定糖法测定提取蛋白中蛋白和糖的比例.流式细胞仪检测提取蛋白诱导肿瘤细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率；透射电镜观察经该蛋白作用的肿瘤细胞的凋亡形态.结果 LFP91 -3经分离纯化,可得Ⅰ～Ⅳ共4组蛋白峰,且第3组的收集液抑瘤率最高.SDS - PAGE电泳结果显示第3峰顶部23～26管收集液主要含有19 kDa左右的蛋白,其他分子量的蛋白含量极低.测得该蛋白中蛋白和糖比例约为3∶1.MTT法显示提取蛋白在体外能明显抑制鼠肉瘤细胞株S180细胞的生长.流式细胞仪检测结果表明提取蛋白能在体外诱导S180细胞凋亡.透射电镜下,经提取蛋白作用的S180细胞,呈明显的凋亡形态.结论 粗蛋白LFP91 -3经
作者：武永红；黄敏；曹励民；李萍
来源：时珍国医国药 2012 年 23卷 3期
