目的:探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)AC000061.1调节
CFTR基因表达在非梗阻性无精子症(nonobstructive azoospermia,NOA)发病机制中的作用。
方法:基因芯片检测梗阻性无精子症(obstructive azoospermia,OA)组(50例)、NOA组(50例)及对照组(50例)患者的睾丸组织中差异表达的LncRNA 并对其对应的靶向mRNA进行生物信息学分析,用qRT-PCR和Western blotting法检测三组患者的睾丸组织凋亡基因
Bcl-2表达差异。qRT-PCR验证三组患者睾丸组织、血清、精浆中LncRNA AC000061.1和
CFTR mRNA表达水平。酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清和精浆中CFTR蛋白浓度。构建LncRNA AC000061.1过表达(H-LncRNA组)、沉默(Si-LncRNA组)及空载对照组载体转染至睾丸癌细胞系(NTERA-2),qRT-PCR验证LncRNA AC000061.1及
CFTR mRNA的表达,Western blotting检测CFTR蛋白水平,CCK-8检测细胞增殖能力,流式细胞术及TUNEL凋亡试剂盒检测细胞凋亡率。
结果:芯片检测和qRT-PCR显示,与对照组相比,NOA组睾丸组织LncRNA AC000061.1和
CFTR表达降低(
P=0.033,
P=0.042),OA组LncRNA AC000061.1表达无差异
作者:杨慧敏;傅赟星;王飞苗;王亚飞;季静;李嘉玲;胡蓉
来源:中华生殖与避孕杂志 2021 年 41卷 9期