目的研制抗人血管性血友病因子(vWF)单克隆抗体(McAb),鉴定其各种生物学特性.方法Ⅷ因子浓缩物经Sepharose 4B凝胶柱提纯出vWF蛋白,免疫Balb/c小鼠,按常规方法融合并经间接ELISA方法筛选,制备稳定分泌抗vWFMcAb的细胞株,并对McAb的亚型、免疫活性及组织特异性等进行鉴定,运用放射免疫方法等与单抗SZ-29,SZ-34进行比较.结果分离纯化出vWF,vWF抗原含量为120IU/mg,并成功制备了一株抗人血管性血友病因子McAb,暂命名为4E10.琼脂糖双扩散鉴定为IgG1类,ELISA法测定其腹水效价为5×10-5.放射免疫分析证实McAb4E10能特异的与血浆中vWF蛋白结合,应用间接免疫荧光法显示出与人脐静脉内皮细胞内vWF所特有的颗粒型荧光反应.流式细胞仪及免疫组化法测定表明McAb4E10与人脐静脉内皮细胞反应呈阳性,与外周血红细胞、白细胞、未活化的血小板不反应,而与其他组织细胞没有反应.放射免疫测定证实McAb4E10与SZ-29,SZ-34识别vWF蛋白上不同的结构.还原条件下Western blot法证实McAb4E10和SZ-29都能识别相对分子量为225kD和180kD左右的单链蛋白多肽.结论制备出了抗人血管性血友病因子单克隆抗体4E10(McAb4E10),它能特异识别血浆及内皮细胞的vWF,将对相关血管性疾病的诊断分析提供有用的工具,也可能有利于对vWF多聚物的功能位点的
作者：邵晓雁；沈飞；邵波静；李佩霞；阮长耿
来源：苏州大学学报(医学版) 2003 年 23卷 2期
