目的 克隆结核分枝杆菌的ESAT-6和CFP-10基因,构建能同时表达两基因的重组腺病毒活载体,为研制能有效防治结核病的重组腺病毒活载体疫苗打下基础.方法 首先利用PCR技术克隆结核分枝杆菌的ESAT-6和CFP-10基因,将两者通过IRES串连插入腺病毒转移载体中,构建重组穿梭质粒pShuttle-CMV-ESAT-6-IRES-CFP-10.该穿梭质粒转化含有腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的BJ5183感受态细胞,经间源重组获得复制缺陷型重组腺病毒载体pAdeasy-1-pShuttle-CMV-ESAT-6-IRES-CFP-10.PacI酶切线性化该质粒,转染AD293细胞进行病毒包装.结果 ESAT-6和CFP-10基因成功克隆,其序列与GenBank公布的一致.两者通过IRES串连插入腺病毒转移载体,获得的重组穿梭质粒经同源重组,成功获得复制缺陷型重组腺病毒质粒Adeasy-1-pShuttle-CMV.ESAT-6-IRES-CFP-10,转染该质粒的AD293细胞出现细胞病变效应.结论 成功克隆了分枝杆菌的ESAT6和CFP-10基因,构建了含IRES串连的ESAT-6和CFP-10基因的重组腺病毒,为重组病毒活载体疫苗的研制奠定了基础.
作者：房红莹；罗满林；王蕾；顾冠彬；邓碧亮
来源：苏州大学学报（医学版） 2009 年 29卷 1期
